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1943年，吉村班先后修建了一个小的和一个大的冷冻实验室。从此，冻伤实验随时都可以进行了。吉村班用活人进行实验有许多方式，如“抗寒”实验、“耐寒”实验、解冻实验、“治疗”实验等。其中，解冻实验尤为残酷。731部队队员把冷水浇在实验对象身上，冷水很快结成冰，然后，经过一定时间让冰融化，被实验的人发出阵阵痛苦的呻吟。有的冻伤人的手被立即插进温水或热水中，烫得脱去皮。经过反复实验，被当作冻伤实验材料的人不是被活活折磨死，就是冻伤部位溃烂，肉和骨头坏死、变黑而被截肢。即便有人幸存，731部队也还要继续把他们当作其他实验的材料使用。正如《赤旗报》记者下里所说，“马路大”无一生存，他们惟一的出口“就是焚尸炉的烟囱。他们只能化为灰烬从烟囱中出来。”〔法〕爱德华·贝尔著、刘汉全译《天皇裕仁传》，黑龙江人民出版社，1992；第172页。
第五，毒气实验。这是731部队以活人为材料的实验方式中最残酷的一种。石井四郎的司机越贞亲眼看到731部队的队员每天将被关押的中国人推进密封的玻璃柜内，分别注入不同浓度（1度、2度、3度）、不同种类的毒气进行实验，直至将他们毒死为止。这种实验对象多是冻伤实验的幸存者。731部队除用活人进行毒气实验外，还使用毒气大规模地杀害反抗实验的被关押的中国人、苏联人。中央档案馆档案：上田弥太郎的供词。
第六，解剖观察。731部队对人体细菌传染实验，要经过临床观察、解剖观察和病理观察3个阶段。解剖观察，一般是作尸体解剖，但根据其需要，也进行活体解剖。活体解剖既有对病体的解剖，也有对健康人的解剖，以便作对比观察。解剖取出的脏器都作为标本陈列保存，供病理研究。
解剖室里，解剖台前，活生生的事实暴露了日本细菌战犯们刽子手的狰狞面目，证明731部队是一座地地道道的食人魔窟。
第五部分：血腥屠杀——关东宪兵队及其暴行关东军第731部队罪恶（8）
对尸体的解剖，731部队的刽子手们常常采取乱刀解剖法，即将尸体大卸八块，在脏器里取出菌液，然后把空壳尸体投进焚尸炉。原731部队队员田村良雄记述了他看到的尸体解剖的具体情景。他说，有一天，他跟着宇野诚技师来到特别班的解剖室，作解剖前的准备。解剖室里有3张解剖台，一张解剖台的排水口正在往下滴着鲜红的血，滴进放在下面的玻璃瓶里。消毒器里正在咕嘟咕嘟地煮着解剖器械。这里刚刚作完解剖。另一张解剖台上，停放着一个奄奄一息的人，一个等待死亡的被实验者。现在，就要对他进行死亡观察了。这时，铃木启之少佐和带班的细矢技师走进解剖室。随着铃木“开始”的命令，细矢暗示田村递过了解剖刀和止血钳，已被泼上消毒水的中国人脸庞紫胀、口里往外流着血，呼吸极度困难，处于昏迷之中。铃木看了中国人一眼后，又下令注射强心剂樟脑液。这时，被用脚镣、手铐固定在解剖台上的中国人猛然睁开眼睛，好像是要弄清这次行凶情况似的转过头来，但是，身体不自由了；眼里充满了气愤的泪水，凝视着棚顶；极干渴的喉咙里像是要发出追究暴行的叫喊似的，然而发不出声音，嘴仅是动动而已。与此同时，用左手转着摸中国人脖颈的细矢，用右手的手术刀沿着中国人的颈动脉“咔嚓”一声就切了下去，血“吱”地流了出来。遭受鼠疫病折磨和被宰割的中国人的头左右摆动着，颈部的绳索勒了进去，头部忽然下垂，昏迷过去了。田村惊慌地擦去血。宇野用止血钳子搅动着刀口，他一看见颈动脉，“咔、咔”两下便夹住了血管。细矢马上用手术刀切断了中国人的颈动脉。至此，中国人已经不能动了，嘴角微弱地痉挛，从动脉流出的鲜血流进了田村拿着的30CC的软木塞瓶。不一会儿，忽然停止了。中国人留下了一句满怀仇恨的话：“鬼子！”于是，他的脸色迅速地变了，咽气了。接着细矢倒拿着手术刀，从尸体的上腹部到下腹部，再从下腹部到胸部，洋洋得意地切割下去。然后，又拉开骨锯，锯断肋骨，露出全部内脏。这时，为了制造细菌，杀害更多的中国人，他们又用培养细菌的银耳和医用玻璃器皿，在培养基上使劲地涂抹。20分钟后，中国人的肉体被分割了，滴着血的肉块散乱地丢在解剖台上。他们看着这个被惨杀的尸体，像一只只吃饱了的狼。过了一会儿，他们又回到解剖室连续“作战”了。〔日〕田村良雄：《细菌战——七三一部队的野蛮行为》（中国归还者联络会编《三光——日本战犯侵华罪行自述》），世界知识出版社，1991；第27页。
1943年，731部队计划用一个男性少年作为“实验材料”，进行一次对比性病理研究。但是，特设监狱里没有这种“实验材料”。于是他们按照北野政次的决定，在长春街头发现了一个中国流浪儿，并以政治嫌疑犯的罪名把他抓起来，押送到平房，然后杀害了。原731部队的一名队员说：把抓来的一名年仅12岁的少年进行活体解剖，肠、胰腺、肝、肾、胃等各种内脏从睡眠状态中的少年体内顺次取出，经一一分理，砰、砰地扔进铁桶里，再立刻把铁桶里的脏器放入装有福尔马林液的玻璃容器内盖好。取出的内脏，有的还在福尔马林液里不停地抽动。〔日〕森村诚一：《魔鬼乐园》，第一部；黑龙江人民出版社，1985；第79页。
除上述实验外，731部队以活人为材料的细菌战实验还有：
人血和马血换用实验，即将马血注入人的动脉血管里，或把人血注入马体内，观察人、马及其血液的变化。
真空环境实验，即将人塞进密封的实验室内，用真空泵将实验室内的空气抽净，然后观察人窒息直至死亡的变化过程。
人体倒挂实验，即将人头在下、脚在上地倒挂着吊起来，观察人受折磨而死的过程。
移植手术实验，即将人的手、脚互换接肢，或将直肠直接连在胃上，或将肝、脾、胃摘除，进行观察。
第五部分：血腥屠杀——关东宪兵队及其暴行关东军第731部队罪恶（9）
梅毒传染实验，多在女“实验材料”身上进行。
细菌武器性能实验，即将被实验的人押入坦克内，用火焰喷射器对着坦克喷射，观察在什么情况下人能被烧死；或用步枪、手枪对着纵向排列的被实验的人发射带细菌的子弹，观察子弹穿透人体的程度；或使用“手枪式”、“手杖式”的小型细菌武器向被实验的活人射击，观察这种武器的效能。
731部队往往把这些实验拍摄成纪录影片或绘制成画面存档，同时采集各类标本作为“科研”的成果进行陈列。对于各种实验结果也都有记录，例如：往人的静脉里注入5CC空气就是致命量，人就会死亡；马血注入人体的反应是，超过100克，人感觉到痛苦，而到500克左右，人就会死亡；低压真空环境中，空气压降到05以下时，人的血管就开始破裂，眼睛鼓出来，1分钟时间就会窒息而死；人体倒挂致死需几个小时，等等。
3以活人为靶子的野外实战演习
731部队在准备细菌战、毒气战的过程中，还不断地进行野外实验，检验它生产的各种细菌、病毒、毒药以及毒气武器的效能。它把这种实验称为“实战演习”。
为了进行野外实验，它根据实验的内容、目的的需要及地理位置、气候条件等，在一些地方设立了实验场。这些实验场分为两种，一种是固定的，如731部队附近的城子沟和安达、佳木斯、陶赖昭等地的实验场，较为常用的是安达实验场；另一种是临时性的，如在肇东县的满沟（今肇东镇）、呼伦贝尔草原和牡丹江一带山区等地。在这些实验场，既进行对各种动物的实验，又进行对活人的细菌武器的攻击、传染实验；有时进行细菌武器或毒气武器单品种的实验，有时还实行细菌武器和毒气的混合实验。进行一些综合性实验的时候，731部队、100部队以及516毒气部队、附近日军的“细菌、毒气谋略队”都参加实验活动。其实，731部队、100部队的野外实验场就是比实验室规模更大、更残酷的杀人场。
据证实，在城子沟实验场，有一次进行炭疽菌的传染实验，731部队将马、牛、羊、猴、兔、鼠等实验动物运到实验场，然后，用飞机在200～300米的上空投掷炸弹，炸弹爆炸后，穿着白色防护服的731部队队员蜂拥而上，检查实验的效果，记录着有关的数据，他们走后，往往留下尚未烧尽的木炭和被烧焦了的各种动物的尸体。在这里，731部队还进行毒气实验。他们把被毒死的动物就地解剖，把其内脏取走，剩下的尸体浇上汽油就地烧掉。对活人进行毒气实验时，是把实验的人用特别囚车从731部队运到实验场，然后，将其转移到台车上，台车有手推车的一半大，上面装有一根柱子，被实验者被绑在这根柱子上。台车可以在铺好的轨道上直接进入实验室，同时，将狗、鸡、鼠等动物也一起放进去，然后关上门，开始实验。
在安达实验场，1944年冬，731部队队员曾把五六名戴着手铐、脚镣的被实验人从卡车上拖下来，倒背双手绑在间隔20米左右的木桩上，飞机从低空将炭疽弹投向目标，炭疽弹爆炸后，使被实验者感染上肺炭疽或皮肤炭疽。然后，将他们运回实验室检查感染情况，并使其在“治疗”过程中死亡。这种炭疽弹扩散面大，传染力强。据原731部队队员说，参加实验的汽车上的尘土都沾有细菌，把这些尘土抹在培养基上又会生出菌来。�